Post by alamin447 on Aug 3, 2023 0:30:55 GMT -5
制备的样品或标准 cDNA 用于一式三份 Taqman 实时 PCR，如其他地方所述25。根据 WBC cDNA 标准曲线计算样品中RRM2和TBP的浓度，并将RRM2水平标准化为同一样品中的TBP水平。 蛋白质印迹 从 TRIzol 提取的苯酚/氯仿相中回收总蛋白（参见前面 RNA 提取的描述）。将样品稀释至相当的蛋白质浓度，并通过添加含有 β-巯基乙醇的 Laemmli 样品缓冲液进行变性。一抗是山羊
多克隆抗RRM2抗体(Santa Cruz Biotechnology)和小体(BD Biosciences)。二抗是辣根过氧化物酶缀合的驴抗山羊抗体和兔抗小鼠抗体(Santa Cruz Biotechnology)。使用 SuperSignal West DuraTelegram 用户号码列表 Extended Duration Substrate (Thermo-Fisher) 进行开发。使用分子成像仪 VersaDoc 3000 系统 (Bio-Rad) 捕获印迹图像。使用Image
-Quant TL软件进行条带定量。 组织和免疫组织化学测定 经加州大学洛杉矶分校机构审查委员会 (IRB) 批准，从患者匹配的治疗前和治疗后病例中获取福尔马林固定、石蜡包埋的人体组织样本。使用 Dako Autostainer Plus (Dako) 进行 IHC 测定，同时对治疗前和治疗后病例的新鲜切片进行染色。将 4 μm 厚的组织切片在二甲